抗坏血酸过氧化物酶活性检测试剂盒AsA

2023/10/23 来源:不详

抗坏血酸过氧化物酶活性检测试剂盒(货号:AKVI)

抗坏血酸过氧化物酶(APX)是以抗坏血酸为电子供体的专一性过氧化物酶,其活性对体内抗坏血酸的含量具有直接影响,并且作为植物活性氧代谢中重要的抗氧化酶之一,可清除体内积累的HO,保护叶绿体和其它细胞组分免受HO及其所产生的羟基自由基的破坏,从而提高植物对氧化胁迫的耐受性,在植物生长发育和逆境胁迫响应等生理过程中发挥着重要作用。

抗坏血酸过氧化物酶可催化HO氧化抗坏血酸生成单脱氢抗坏血酸(Monodehydroascorbate),通过测定抗坏血酸的氧化速率即可表征抗坏血酸过氧化物酶的活性。

抗坏血酸过氧化物酶活性检测原理

测定过程中所需要的仪器和试剂:紫外分光光度计、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。

1.粗酶液的制备(可根据预实验结果适当调整样本量及比例)

按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:(5-10)的比例(建议称取0.1g组织,加入1mL试剂一)处理样品,冰浴匀浆,4℃g离心20min,取上清即为粗酶液,置于冰上待测。

吸光值测定:①迅速混匀并开始计时,测定10s(总时间)时nm处吸光值,记为A1测定和A1空白;②准确反应s后,测定s(总时间)时nm处吸光值,记为A2测定和A2空白;③计算A测定=A1测定-A2测定,A空白=A1空白-A2空白,A=A测定-A空白。注:空白组只需测定1-2次。

注意事项

①准确在10s和s处完成读数,以保证实验结果的准确性;

②为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。

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