黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒尿酸比色法
2023/10/24 来源：不详黄嘌呤氧化酶活性检测试剂盒（货号：AKAO）
黄嘌呤氧化酶（XOD）是生物体内核酸代谢过程中的关键氧化还原酶类，可以利用分子氧作为电子受体或亚甲基蓝、苯醌、高铁氰化物和硝酸盐等人工电子受体催化氧化黄嘌呤、蝶呤和醛类等多种杂环化合物，并伴随产生过氧化氢和超氧自由基等活性氧，具有重要的生理和病理功能，在高尿酸血症的诊断、活性氧生理作用和氧化应激损伤等研究领域具有重要作用。
黄嘌呤氧化酶能够催化黄嘌呤产生尿酸，产物在nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可表征黄嘌呤氧化酶的活性。
黄嘌呤氧化酶活性检测原理测定过程中所需要的仪器和试剂：紫外分光光度计、1mL石英比色皿（光径10mm）、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）
①组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
②细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为（-）：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎（功率20%或W，超声3s，间隔10s，重复30次），4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
③血清（浆）、培养液等液体样本：直接检测或适当稀释后再进行检测。
2.测定步骤
①分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
②根据使用量取出适量XOD工作液37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热20min以上。
吸光值测定：①立即混匀并开始计时，测定nm处初始吸光值，记为A1测定和A1空白；②测定60s时nm处吸光值，记为A2测定和A2空白；③计算A测定=A2测定-A1测定，A空白=A2空白-A1空白，A=A测定-A空白。注：空白组只需测定1-2次。
注意事项
①若ΔA测定大于0.5或A1测定大于1.0时，建议将粗酶液适当稀释后再进行测定，计算时相应修改；
②为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
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